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小鼠小鼠脾臟CD4+T細胞 冷凍細胞操作步驟：

1．收集對數生長期細胞；
2．以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液；用血球計數板計數并計算細胞存活率（至少應該在90%以上）；
3．細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘；
4．將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中（大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液）；
5．將細胞懸液加入到冷凍管中，每管0.5 ml；
6．將冷凍管置于-80℃冰箱中；
7．24小時后，將冷凍管移入液氮罐中；
8．在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復蘇操作步驟：
1．將冷凍管迅速由液氮轉入到37℃水浴中，冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染，不定時攪拌加速解凍；
2．當細胞*解凍后，用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；
3．將解凍后細胞轉移到含4℃預平衡培養液的試管中；
4．細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘；
5．棄上清，將細胞重新懸浮在新鮮培養液中；
6．將細胞轉移到細胞培養瓶，CO2孵箱中培養；
7．是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度，如果細胞密度過高，用培養液稀釋至適宜濃度。

培養條件：
*培養基：DMEM高糖培養基90%；胎牛血清10%。
培養條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%