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c3h10t1/2細(xì)胞 atcc菌株 c3h10t1/2

更新時間:2016-08-04點擊次數(shù):181

  

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  c3h10t1/2 c3h10t1/2細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株 傳代保藏過程:

  3項下標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇為傳*代,復(fù)壯為第二代。 傳第三代時取1支凍存管自然解凍,將其轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時,工作用菌種為第3代。工作用菌種,分為兩類:一類用于定期傳代(W3),一類用于實驗用(S3)。

定期傳代用菌的傳代其操作步驟如下(斜面接種法):

 

 ?。?)從冰箱冷藏室中取出菌種斜面后,應(yīng)在室溫放置約30分鐘。

 ?。?)將裝有新鮮配制的培養(yǎng)基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期,和傳代菌種一并移入潔凈工作臺,打開紫外燈照射一小時。

 ?。?)關(guān)閉紫外燈。點燃酒精燈,左手握住菌種斜面,將管口靠近火焰上方,右手拿接種棒后端,將接種環(huán)燒紅約30秒,隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過三次。

  (4)右手用無名指、小指及掌部夾住管塞,左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,右手再輕輕拔開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷后再至菌苔上,刮取少量菌苔,隨即取出接種棒并將菌種管口移至火焰上方。 

  (5)塞上管塞,左手將菌種管放下,取營養(yǎng)瓊脂斜面(或改良馬丁瓊脂斜面)一支,照上述操作打開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部向上劃一條直線,然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線,一直劃到斜面頂端,使細(xì)菌接種在斜面的表面上。

  (6)取出接種環(huán),在火焰上方將培養(yǎng)基管蓋上塞子,然后將接種過細(xì)菌的接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

 ?。?)將已接種好的細(xì)菌管置30~35℃細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)22 ~24h,真菌管置23~28℃真菌培養(yǎng)箱zui多培養(yǎng)7天。

  當(dāng)工作用菌種傳代代數(shù)小于5時,可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種,如:(W3)可直接轉(zhuǎn)接為(W4)。按上述程序操作,直至(W4)轉(zhuǎn)為(W5)為止,需重新接種,舊的工作菌種進(jìn)行銷毀。

 

  基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的,是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?;蚯贸褪峭ㄟ^同源重組將外源基因定點整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點,以達(dá)到定點修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對三種基因敲除技術(shù)作比較,描述它們的優(yōu)缺點。

  基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)  1、優(yōu)勢:成熟、可靠、精細(xì)是目前為止*一個可以滿足所有要求的打靶技術(shù)  2、局限性:  A 需要ES細(xì)胞,目前只有小鼠有的ES細(xì)胞,其它模式動物的ESC還不能實現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用?!  周期長、工作量大、費用相對比較高  3、可提供服務(wù)類型:  A 全基因敲除模式小鼠  B 條件性基因敲除模式小鼠  C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠  D 基因敲入模式小鼠

  E ROSA位點定點轉(zhuǎn)基因  TALEN技術(shù)  1、優(yōu)勢:基因敲除效率高,速度快,可實現(xiàn)多物種基因敲除

  2、局限性:  基因敲入效率較低,多基因敲除困難,系統(tǒng)構(gòu)建相對復(fù)雜,存在脫靶風(fēng)險

  3、可提供服務(wù)類型:  A 全基因敲除大/小鼠  B 全基因敲除細(xì)胞系

  EGE系統(tǒng)  1、優(yōu)勢:基因敲除/敲入效率高,速度快,可實現(xiàn)多基因、多物種基因敲除/敲入,系統(tǒng)構(gòu)建簡單  2、局限性:  存在脫靶風(fēng)險,但通過選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率,In vivo脫靶可通過傳代去除.  3、可提供服務(wù)類型:  A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠  B 全基因/條件性報告基因敲除/敲入大/小鼠 C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建  D 細(xì)胞系敲除/敲入

 

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  研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。胎牛血清使用錯誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80℃太久。

  研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷, 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。

 

  細(xì)胞種類較多,本展臺無法一一體現(xiàn),以上是我司部分產(chǎn)品,若沒有看到您需要的細(xì)胞,請及時與我們?nèi)〉?,咨詢?/p>

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